▋ DNA 可称化所学
人们现如今对 DNA 的系统性，并不一定是通过多重 PCR、real-time PCR 和对稀有事件的研究成果来顺利进行的，因此高质量可称化 DNA 颇为重要。高质量的系统性副产品是获高质量的河段定量结果的必要必须。我们必须认识到 DNA 可称化系统的指导原理，然后针对早先应用必需最适宜的无机化学操作过程。
DNA 可称化常见的挑战
● 混合成物样品从而释放 DNA● 将 DNA 分子与脂质、酶、脂类和 RNA 等其他分子分开● 保持 DNA 分子的无损
DNA 来源不同遭遇的挑战也不同。例如巧克力等饮品，其之中带有外周的衍生物，如果这些衍生物被已可称化的 DNA 运载，则可能抑制河段的定量。从革兰氏阳性细菌之中分开 DNA 须要高效的混合成物细菌厚厚的肽聚糖蛋白质壁。一定要维护你可用的 DNA 可称化新方法能够解决采样遭遇的新问题。
动人提示：体内和组织采样在可用前需冷冻保存，以可避免大分子对 DNA 的摧残。在取借助于一小部分顺利进行 DNA 可称化在此之前需将解冻后的体内无论如何混合成。
DNA 可称化必需方法
DNA 可称化：混合成物、紧密结合和干净
混合成物：摧残蛋白质或组织-酶妥善处理-飞轮摧残-去垢剂妥善处理
混合成物：使酶顺利进行性或失去活性-金属离子去垢剂、受热、还原剂、尿素和胺类类-酶活性（如酶活性 K）
混合成物：使内源性大分子-氰化（例如 EDTA）-酶活性（例如 酶活性 K）
紧密结合与干净：分开 DNA-去掉其他大分子（如 RNA）-去掉酶 •有机合成 •食盐析 •与固彼此之间多种并不一定紧密结合 -硫化物组分 -烷基互相交换柱 -静电致密
紧密结合与干净：从其他蛋白质微粒之中分开 DNA 的新方法
■ 有机合成
当苯酚或苯酚: 混合成物与蛋白质混合成物物混合成时，但会形成两彼此之间：水彼此之间和有机彼此之间。重氮 DNA 分子进入重氮彼此之间或「水彼此之间」，而顺利进行性的酶和其他蛋白质碎裂则进入有机彼此之间。
■ 食盐析
食盐可以让酶脱水，从而降较差其聚合，然后顺利进行性，顺利进行性后的酶失掉溶解性从而结晶；通过离心法去掉结晶的酶和蛋白质碎裂。常以的食盐仅限于仅限于硫酸盐、甲酸钾或甲酸铵。
■ 与固彼此之间多种并不一定紧密结合
绝大多数的 DNA 可称化新方法主要依据的原理是：通过必需性地与固彼此之间多种并不一定紧密结合, 从而从粗混合成物物之中可称化 DNA。这类固彼此之间多种并不一定仅限于硫化物多种并不一定和烷基互相交换树脂。并不一定来说，可用固彼此之间多种并不一定可称化 DNA 比其他新方法五小来得短、操控来得便捷，因为不须要任何液氨，而且可以微型化和电子化从而充分利用高通量。
与 DNA 紧密结合的固彼此之间多种并不一定并不一定
硫化物组分：DNA 但会在高ppm离液食盐（例如苯酚胺类）依赖于的情况与硫化物紧密结合，但是酶不但会。可以可用带有乙醇的干净液转化成食盐，然后在较差金属离子强度的溶液（例如 TE 或水）之中除掉 DNA。
烷基互相交换柱：可称化的主要原理是 DNA 之中带负电荷的磷酸官能团与互相交换柱上带电场的分子彼此之间粒子。在较差食盐必须下，DNA 与多种并不一定紧密结合，而酶和 RNA（取决所用的缓冲液）则被干净转化成。DNA 可以用高食盐缓冲液除掉。
在致密表面顺利进行的 DNA 静电分开：许多商品化试剂盒的指导原理是可用静电致密从溶液之中捕获 DNA。静电致密可以由硫化物等材料金属制，DNA 的紧密结合和除掉取决食盐ppm或 pH。
DNA 、ppm和无损
可称的、完整的 DNA 对于许多河段定量至关重要。常以指标 DNA 的常以新方法是在 260nm 的电磁波处（DNA 在该电磁波下有小得多吸收穹丘）定量采样吸表面温度。通过定量 280nm 电磁波处的吸表面温度，并且计算 260nm 与 280nm 处的吸表面温度之比，可以定量借助于可称化操作过程之中可能可用到的或渗入在采样之中的其他有机衍生物。荧光染料和 qPCR 是计算 DNA ppm并确定纺织品无损的替代新方法，主要在本指南早先关于大分子定量章节顺利进行参考谈论。
幻灯片来源：普洛麦格
编辑： 翟超男相关新闻
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