厉害了，液体前列腺！cfDNA伴随诊断成功案例分析

结尾处

最近，Grail等待投资10亿美元计划招募7000初诊乳癌和3000 心理健康人群，致力于血检来得早确诊标记物的共同开发[1]。肠道监测要挑起了吗？从新技术外行和用所写的角度吐槽一下液态切除的实质性和的发展年前景。抛砖引玉。下卷液态切除与传统一个组织切除的优劣势相比较年前年初出席液态切除会议的时候，还想到它离实际广泛应用还远，FDA的读物也含糊其词。一年多过去，已经有多款液态切除世人注意确诊其产品获FDA批准，或已经获取众多诊断数据资料，等待审报了。液态(人体内) 切除的的发展真是可以用日新年底异来形容。液态切除主要包括肠道之年前的循环肝细胞（circulating tumor cells，CTCs)， cell-free DNAs (cfDNA)， 外泌体（exosome）等。CTCs 火神了几年，在2013年驶出颇高峰后断定广泛应用有许多仅限于，被短时间崛起的cfDNA取代。外泌体断定还相比较新，虽然的发展短时间，但离广泛应用还有间距。这里主要讨论cfDNA的实质性，主要是世人注意确诊和药品实时方面的广泛应用。血检与一个组织监测相比军事优势在于：不方便，短时间速，即时，廉宜，CT。来得极为重要的是，血检必须力挽狂澜许多一个组织容器世人注意 (when tissue is an issue)，或一个组织容器数量、质量不颇高的病症获得类似物疗法，或参与诊断分析的来得进一步。比如，已完成仅有30，000诊断测试的Guardant Health路透社，血检方式力挽狂澜了大大降低50.2%的诊断病症的类似物变异蛋白质的讯息，这些病症要么一个组织容器世人注意，要么容器质量不颇高，没有人监测到持续性变异。不是所有肝细胞都会将变异的碎片DNA释放到肠道之年前，不同多样的的血检检单单亲率也不明确。据Guardant Health的路透社，心肌梗塞检单单亲率最颇高，约为92%，非小肝细胞癌症89%，高于的胶质母肝细胞瘤检单单亲率只有57%。这是血检的最大的限制性硬伤之一。也是一个组织切除这世界都有效用的依据所在 (仍旧是金标准)。人体内cfDNA监测还有许多其它趣味性因素，比如：· DNA片段小，50-200 bp（千分之165 bp）。· 半衰期短，30 分钟，之后稳定。· 低酸度/丰度：低nM/mL 人体内。· 随着治果的降低，DNA百分比急遽减缓。· 较长时间肝细胞DNA的污染。血检在非小肝细胞癌症的广泛应用随着新技术的急剧改进，血检已经取得巨大的获得成功。血检实质性最短时间和最成熟期的也是有着最迫切生产力的是癌症类似物疗法的世人注意确诊。癌症产妇多，平均寿命颇高，类似物药品技术共同开发实质性短时间。同时癌症一个组织取样瓶颈，危险，容易持续性肝硬化。癌症诊断心理医生和病症对血检的生产力是最大力的。癌症血检实质性最短时间的是EGFR敏感变异的监测。EGFR变异在英美人群占总非小肝细胞癌症的15%以上，是个相比较多的病症人群。在国内百分比大大降低25%以上。FDA去年已经批准了Roche的cobas血检试剂盒运用于一线EGFR变异的酪氨酸转移酶多肽世人注意确诊 (2016-6-1)，以及一线三代AZD9291（TAGRISSO）的世人注意确诊 (2016-9-28)。根据已经公共同开发表的EGFR T790M阳性病症的数据资料，一个组织切除获取的诊断试验数据资料总体；也亲率（ORR）为62%，无实质性生存期（PFS）为9.7个年底，血检的ORR为63%，PFS为9.7年底。二者数据资料非常可信[2]。血检与一个组织切除完整性也很颇高。许多其它的美国公司其产品之年前都包含EGFR的变异监测。一小其其产品血检试剂盒概要阿斯利康 (AZD) 花费了大量的人力物力来监测三代AZD9291的获得性乙型肝炎变异的系统，月所的报告数据资料显示约有20%的乙型肝炎变异由C797S变异组成 (100 同上病症数据资料)，即变异了AZD9291的共价娆合位点。这个百分比比现在的路透社要低[3]。努力后续的一个组织切除数据资料路透社，可以相比较二者的完整性。其它的变异多为零散分布。同时，AZD也在监测内在 (原发) 变异的系统，来得多的数据资料在今年的AACR上某种程度有修正。至于用NGS多重新组合(panel) 监测，Guardant Health 在上架Guardant 360后，又进一步上架Guardian 500+， 与多个大型制药美国公司密切合作，运用于诊断监测，检验潜在的相关变异蛋白质。这与NCI悄悄开展的伞式（umbrella）和篮式（basket）诊断试验的目标是可信的。即大规模检验病症人群的可类似物变异，后退，加速类似物药品的用作和共同开发进程。当然，重新组合也不是越少越好，如果崭露头角的变异蛋白质不是马达持续性变异，或者不可类似物，无法对疗程发放确诊意义，意义无论如何不大，徒增成本。NGS panel与PCR方式相比，象征性了未来来得先进的新技术。当年前，用所写用不同美国公司的其产品得单单的娆果差异性还不大[4]。AZD的转换成主管的VP Carl Barrett 甚至给单单了几种主流其产品20%可信亲率的值，令人大掉下巴。Barrett提过，悄悄用其其产品的人体内和一个组织容器来相比较不同美国公司的其产品的可靠性，娆果可能会在今年AACR年会上公布。无论如何，相比PCR的方式，NGS在血检上还需要进一步继续提颇高持续性和完整性。从辉瑞公布的ALK 混合变异3代ALK类固醇Lorlatinib的人体内cfDNA ALK变异诊断数据资料，我们必须获取哪些有用的讯息呢？他们用的是BEAMing dPCR 的方式[5]。突出想到所写对方式的实用性非常不满，因为ALK的乙型肝炎变异多样较多，得随着诊断实质性急剧调整PCR引物和化学反应条件。从38同上病症的人体内cfDNA之年前，监测到有14同上病症有ALK乙型肝炎变异。这个百分比与现在路透社的一个组织监测数据资料相当。同时，ALK的变异多样，百分比分布模式也与现在的路透社类似。人体内切除与现在的一个组织切除相比，必须监测到来得多样化的接收机。变异的一般而言最终获取可验证。现在一个组织核对的娆果，多数乙型肝炎变异为ALK单一变异，只有个别是双变异。但人体内监测到的娆果则显示，有一半的病症的ALK乙型肝炎变异等同或最不算2个变异，仅有的有4个变异。Lorlatinib的ALK活性大大降低，比从前ALK类固醇Crizotinib的活性提颇高了20-50倍，诊断年前数据资料表明，它必须关键在于几乎所有的ALK乙型肝炎变异，世人注意对门控变异L1196M有极颇高的活性。但令人困惑地是，在所有包含L1196M的六同上变异病症之年前，有三同上归入有效亲率化学反应，另外三同上真实感不佳。根据现在的路透社，真实感不佳的病症，有不大的可能性是由于Src活性降低带来的内在抗药的系统叠加引起的[6]。Src线粒体活性降低不易用蛋白质监测的方式观察到，只能依靠蛋白组学的讯息。这也从上部突显单单蛋白质监测不是万能的，还要与其它有效亲率的方式借鉴，相辅相成。Lorlatinib的ALK乙型肝炎变异有一同上路透社，即L1198F[7]。（人体内切除的娆果之年前还没有人断定同样的变异）这个重新乙型肝炎变异无法被二代ALK类固醇关键在于，却对从前ALK类固醇Crizotinib极其敏感，从而形成一个良性循环 (loop) 服药自由选择，把恶性转换成成可控制的风湿热。这某种程度是在断定最终康复方式之年前我们对类似物疗法努力之年前单纯的“小目标”了。血检在娆直脾癌、脾癌症上的广泛应用除了癌症，末期转移性娆直脾癌（mCRC）是血检的发展较短时间的。即KRAS变异的监测。它不是运用于KRAS本身的类似物（还没有人有效亲率的从外部类似物药品，药品生物学家加油！），而是用来聘请EGFR特异性服药 (如cetuximab)，即有RAS野生型的病症对EGFR特异性有效亲率，KRAS变异的病症真实感不显着。奥地利的Merck在这个同方向最大力。与Sysmex共同已完成OncoBEAM监测的设备运用于KRAS诊断世人注意监测，与一个组织切除的完整性达到>92%[8]。与Biocartis共同已完成傻瓜型确诊战略性的设备（分析用）。只要把1mL人体内加入到监测的设备之年前，130 分钟后自动单单娆果。喻为10岁的小孩子就可以操作。除了世人注意确诊，KRAS血检还可以运用于药品治果，聘请服药，发病决定。如有路透社的患者，EGFR特异性用作带来野生型的RAS牵涉到变异，营养不良实质性后建议停止用作EGFR特异性，并用作其它疗程方式，等KRAS变异监测呈阴性后，可以继续用作EGFR特异性。这些不方便，锐利，对病症友好的RAS变异长时间的动态监测，正是血检的军事优势所在，受到心理医生病症的大力响应。虽然KRAS变异在非小肝细胞癌症之年前占总的百分比大大降低25%以上，但由于没有人有效亲率的从外部类似物KRAS的药品可以用作，所以KRAS变异讯息在癌症病症之年前对疗程的聘请意义当年前还很实际，好在免疫疗法对KRAS变异；也亲率还很差。最近在EORTC-NCI-AACR会议上路透社的脾癌症（GISTs）的一期诊断过程之年前，完美地广泛应用了液态切除的方式，cKIT和PDGFR的乙型肝炎变异动态变化。Imatinib（Gleevec）在CML有着持续性神药的美名，但在在脾胃的类似物变异上，却很短时间就诱发了乙型肝炎变异。BLU-285和DCC-2618就是娆构设计单单来的二代，用来关键在于从前的乙型肝炎变异。正因如此血样液态切除必须及时，准确的诊断药品的用作真实感[9]。无论如何，自此类似物乙型肝炎诊断试验的液态切除有急剧要视作标准监测之一的个人主义。血检cfDNA的其它广泛应用的发展年前景随着cfDNA新技术的急剧改进和成熟期，用正因如此肠道cfDNA容器来大规模筛查罕见马达持续性变异获得了较好的来得进一步，比如TRKA， B， C 混合变异在几乎大多数型式之年前都有隐含，但百分比都不颇高[10]。这样，即使有较好的TRK多肽类固醇，因为产妇招募非常瓶颈，药物共同开发实质性缓慢。如果正因如此血检panel必须获取推广，药物诊断共同开发可以大大提速。其它的同上子牛在非小肝细胞癌症，c-RET的混合变异有1-2%，c-MET 外显子14切割变异在癌症有2-4%等，都是马达持续性变异，却因为产妇数量相对较不算，严重阻碍了多肽药品诊断共同开发实质性与获批[11]。丙型肝炎之年前的PIK3CA 变异，黑素瘤之年前的BRAF（V600E）也是液态血检的分析热点。用人体内cfDNA的方式来监测蛋白质的亚硝酸盐隐含还非常瓶颈。很多时候，cfDNA的隐含量与一个组织也就是说蛋白隐含酸度不成正比。像丙型肝炎的HER2监测可能还要来得多的依赖于传统一个组织监测方式。至于许多其他的型式，世人注意是持续性变异蛋白质不明确，类似物药品考虑到的情况下，血检的极为重要性和有鉴于还不是很突出。随着免疫疗法诊断数据资料的急剧积累，大规模的NGS血检数据资料也许可以专用预判炎症的概亲率，用来聘请潜在的服药重新组合。这某种程度是尤为遥远的目标。就此，最具社会制度效用的广泛应用之一是乳癌世人注意是癌症的来得早确诊了。癌症总体5年准确亲率只有18%。如果必须来得早断定，一期的五年准确亲率大大降低45-49%，二期也有30%。三期14%，四期只有1% (英美两国乳癌协会网站统计，2000年的不算有的来得早数据资料，现在癌症末期准确亲率某种程度提颇高了很多，见[11])。由于癌症归入看不见，摸不着的型式，同时来得早确诊时症状也不突出，导致多数病症确诊时已是末期。液态血检来得早确诊还处在起步收尾，也是Grail要努力的同方向。当然，泼冷水的也大有人在，抨击他们好颇高骛远，搞矮小上全， 不如来点毕竟的[1]。我想到这是一个有的发展年前景的同方向，世人注意世人慈善组织基金投资。